pythonでは，イテレーションでファイル読み込みをするため，明示的にファイルの読み込みの終了を示すEOFを意識することはありません．ですが，複数のファイルを同時処理する際にハマったので，EOFの取得方法を調べてみました．

ファイルオブジェクトのreadline()が空文字かを調べる方法

readline()の返り値が空文字のとき，EOFまで達しています．

# -*- coding: utf-8 -*-

#!/usr/bin/env python

filename = 'test.txt'

with open(filename,'r') as fi:
    while True:
        line = fi.readline()
        if not line:
            break

組み込み型のファイルオブジェクトのStopIterationを用いる方法

※python2.3以上，python3以下でしか動きません．

ファイルオブジェクトからnext関数を呼び出した場合，EOFに達するとStopIterationという例外が発生します．これを捉えることで，EOFを検知できます．

  # -*- coding: utf-8 -*-
    
  #!/usr/bin/env python

  filename = 'test.txt'

  with open(filename,'r') as fi
  	while True:
		try:
			line = fi.next()
		except StopIteration: # EOFに到達
		        break

参考リンク

python2のファイルオブジェクト
- http://docs.python.jp/2/library/stdtypes.html?highlight=read#bltin-file-objects
python3のファイルオブジェクト
- http://docs.python.jp/3/library/io.html#io.TextIOBase